食品中毒素與有害成分的檢測

      隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，各種有機(jī)化合物與防治病蟲害的農(nóng)藥常用在農(nóng)作物上，雖然一定程度地促進(jìn)了農(nóng)作物的生長，保證了生產(chǎn)產(chǎn)量，但降低了農(nóng)作物的安全性，有一些強(qiáng)性農(nóng)藥或獸藥，即便經(jīng)過雨水洗刷，依然不能*清除，還有部分殘留，這時若采摘者或食用者在食用時沒有仔細(xì)清洗，這些農(nóng)藥或獸藥進(jìn)入體內(nèi)，會對人身體健康造成巨大的影響，嚴(yán)重者甚至威脅人體的生命安全，而利用液相色譜技術(shù)對其中殘留的、不易被發(fā)現(xiàn)的各種農(nóng)藥或獸藥進(jìn)行檢測，可重現(xiàn)其中的有害毒素成分，讓食用者充分辨別食品的質(zhì)量安全。

1、農(nóng)藥殘留量的測定

      目前蔬菜水果中不同種類農(nóng)藥的殘留測定方法主要是氣相色譜法（GC）或氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS），但 GC 對沸點高或熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥需進(jìn)行衍生化處理，這樣就不可避免地增加了樣品預(yù)處理的難度，也使它的應(yīng)用受到一定程度的限制。

      李永新等建立了同時測定蔬菜水果中12種農(nóng)藥殘留的反相液相色譜分析方法。將樣品搗碎，用乙酸乙酯超聲提取，經(jīng)Florisil固相萃取柱凈化、正己烷-二氯甲烷（1∶1）洗脫、氮氣吹干、甲醇溶解并定容后，采用液相色譜柱分離、紫外檢測，以外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，5種有機(jī)磷農(nóng)藥、6種ni除蟲菊酯類農(nóng)藥和除草劑二甲戊樂靈的檢測限為0.114～2.65ng。應(yīng)用該法對從市場上隨機(jī)購買的蓮白、小白菜、黃瓜等20個蔬菜樣品和蘋果、梨等20個水果樣品進(jìn)行檢測，其中yang化le果的檢出率分別為55%和45%，xin硫磷的檢出率分別為50%和30%，由此可見，明文規(guī)定的不得用于蔬菜、瓜果的劇毒、高毒農(nóng)藥仍有檢出。

      何紅梅等建立了液相色譜法分離、紫外檢測器檢測同時測定蔬菜中除蟲脲、氟鈴脲、氟苯脲等7種苯甲酰脲類殘留量的方法，色譜柱為 SunFireTM C₁₈［250mm×4.6mm（i.d.），5μm］，柱溫為室溫，檢測波長為260nm，同時分離的農(nóng)藥種類多，但需梯度洗脫，對儀器的要求較高。丁慧瑛等建立了同時測定蔬菜中除蟲脲等11種苯甲酰脲農(nóng)藥殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，C₁₈柱分離，甲醇-0.005mol/L 乙酸銨溶液為流動相梯度洗脫，電噴霧負(fù)離子模式離子化，三重四極桿質(zhì)譜測定，方法回收率為69%～109%，所需儀器并不普及。苯甲酰脲類農(nóng)藥中除蟲脲和氟鈴脲的測定居多，胡敏等采用反相液相色譜法，C₁₈ 色譜柱，甲醇-水（75∶25）為流動相，254nm 波長下用 DAD 檢測器，測定了除蟲脲的含量。

      李海飛等運用HPLC柱后衍生熒光檢測法，測定了蘋果、梨、桃、葡萄、香蕉和芒果等水果樣品中ti滅威亞砜、ti滅威砜、滅多威、三羥基ke百威、ti滅威、ke百威和甲萘威7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量，結(jié)果7種農(nóng)藥3種不同濃度的平均添加回收率在72.5%～116.2%，低檢出限為0.0037～0.0074mg/kg。

2、獸藥殘留量的測定

      獸藥殘留是指對食品動物用藥后，動物產(chǎn)品的任何食用部分中的原型藥物或/和其代謝產(chǎn)物，包括與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)的殘留。殘留較大的獸藥主要包括抗生素類、合成抗生素類、抗寄生蟲類、生長促進(jìn)劑和殺蟲劑等。

      研究人員建立了一種養(yǎng)殖海水中諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星3種喹諾酮類抗生素殘留量的液相色譜-熒光測定方法：水樣經(jīng)稀鹽酸調(diào) pH 后經(jīng) HLB 固相萃取柱富集、凈化，用外標(biāo)法定量；結(jié)果表明，該方法的靈敏度高，重現(xiàn)性好，適用于養(yǎng)殖海水中諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星的檢測。

      王帆等研究了檢測大豆異黃酮類保健食品中三種雌激素（雌二醇、雌酮、己烯雌酚）含量的分析法。采用 Hypersil ODS2 C₁₈色譜柱，流動相為甲醇-水（體積比53∶47），流速1.0mL/min，檢測波長280nm，該方法的線性范圍在0.5～250mg/L，三種雌激素的低檢出限分別為0.8mg/L、0.9mg/L、0.4mg/L。

      陳輝華等建立了同時檢測水產(chǎn)品中四環(huán)素類和氟喹諾酮類獸藥多殘留的HPLC法。樣品經(jīng)固相萃取小柱凈化，以甲醇-丙二酸-氯化鎂水溶液梯度洗脫，紫外檢測器檢測。對樣品預(yù)處理和色譜分析條件進(jìn)行了優(yōu)化，8種抗生素（土霉素、四環(huán)素、金霉素、沙拉沙星、恩諾沙星、達(dá)氟沙星、環(huán)丙沙星、單諾沙星）在0.1～10.0mg/L 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，低檢出限（S/N=3）為0.011～0.051mg/kg，定量下限（S/N=10）為0.035～0.170mg/kg，平均加標(biāo)回收率為81.0%～96.0%。

3、霉菌毒素的檢測

      每年霉變糧食的量占據(jù)了總糧食產(chǎn)量的很大一部分，這不僅對經(jīng)濟(jì)造成了損失，若霉變的糧食被人畜食用，還會引發(fā)中毒、癌癥等癥狀。霉菌毒素主要有huang曲霉毒素、玉米赤霉烯酮等，尤其是huang曲霉毒素，被列為誘發(fā)癌癥的高危因素。而某些初步霉變的糧食，其感官上的變化并不明顯，因此，對霉菌毒素的檢測尤為重要。HPLC 可依據(jù)不同微生物的化學(xué)組成或其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，直接分析樣品中各種細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，確定其病原微生物的特異性化學(xué)組分，從而確定被檢測食品中是否存在微生物超標(biāo)以及是否威脅到人類健康等。

      程樹峰等建立了一種快速檢測糧食中huang曲霉毒素 B₁、B₂、G₁、G₂ 的碘柱前衍生-液相色譜法：樣品經(jīng)提取液處理后，加入適量碘衍生劑衍生，衍生后進(jìn)行色譜分析，結(jié)果4種huang曲霉毒素在7min內(nèi)測定完成，低檢出限均在皮克水平。

      牟仁祥等建立了同時檢測糧谷中T-2和 HT-2毒素的免疫親和柱凈化-液相色譜質(zhì)譜法：免疫親和柱凈化后，采用液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）測定，結(jié)果T-2和 HT-2毒素在0.005～0.500mg/L 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，在加標(biāo)條件下，T-2和 HT-2毒素的平均回收率為76%～90%，低檢出限（S/N=3）分別為0.130mg/kg、0.002mg/kg。

      Pérez-Torrado 等對來自不同的21種玉米粉中的玉米赤霉烯酮霉素進(jìn)行了分析，樣品經(jīng)高壓液體提取后，采用LCESI/MS 檢測，其中包括正離子電噴霧ESI（+）和ESI（-）2種質(zhì)譜檢測方法，結(jié)果ESI（+）和ESI（-）的低檢測限分別為5μg/kg、1μg/kg，僅有一種樣品中玉米赤霉烯酮霉素的含量低于歐盟委員會的標(biāo)準(zhǔn)量。

      楊小麗等采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定了地龍中huang曲霉毒素 B₁、B₂、G₁ 和 G₂ 的含量，結(jié)果表明4種huang曲霉毒素的檢出限分別為0.03μg/kg、0.02μg/kg、0.03μg/kg 和0.02μg/kg。栗建明等建立了中藥材中4種huang曲霉毒素測定的快速液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，表明huang曲霉毒素 B₁ 在0.1021～10.21ng/mL內(nèi)、huang曲霉毒素 B₂ 在0.0612～7.65ng/mL 內(nèi)、huang曲霉毒素 G₁ 在0.193～9.65ng/mL 內(nèi)、huang曲霉毒素 G₂ 在0.121～7.55ng/mL 內(nèi)，線性關(guān)系均良好，r>0.9998；4種huang曲霉毒素的回收率均在77.0%～102.4%之間。

4、N-亞硝胺、多環(huán)芳烴和雜環(huán)芳烴的測定

      腌臘肉品中常添加硝酸鹽或亞硝酸鹽作發(fā)色劑用，由于添加量過大或自身的還原作用在肉品中生成 N-亞硝胺。N-亞硝胺可誘發(fā)肝癌、結(jié)腸癌等。某些 N-亞硝胺化合物，如 N-亞硝基二jia胺、N-亞硝基二乙胺、N-亞硝基四氫吡咯等也是一類致癌物質(zhì)。過去采用氣相色譜法測定食物中的揮發(fā)性亞硝胺，其中僅色譜測定一步便需耗時1h之多，而采用液相色譜法則只需要13min。

      肉品煙熏、油炸、燒烤時常產(chǎn)生多環(huán)芳烴并污染肉品。多環(huán)芳烴（簡稱 PAH）中主要的致癌物質(zhì)有3，4-苯并（a）芘、二苯并（a，h）蒽，而芘和螢蒽對苯并（a）芘的致癌有促進(jìn)作用。分離蒽、苯并（e）芘、芘、苯并（b）螢蒽及苯并（a）芘五個成分，用氧化鋁色譜柱需耗10h，用 TLC 為10min，用GC則苯并（a）芘的保留時間通常為數(shù)十分鐘。應(yīng)用液相色譜法，以 ermaphase ODS 色譜柱，在 4min 內(nèi)即可*分離。分離 PNH 常用的色譜柱填充劑為十二烷基化學(xué)鍵合的薄殼型硅膠（如permaphase ODS、Vy-dac RP、SiI-X-H RP 等），這類填充劑大的優(yōu)點是可以應(yīng)用梯度淋洗，這樣大大有利于縮短分離時間和提高分離效果。

      此外，雜環(huán)芳烴中的主要致癌物為二苯（a，h）氮蒽，在城市空氣的塵埃中、煤焦油及煙草中均含有此成分。各種雜環(huán)烴可在 Zipax 擔(dān)體上涂漬0.5% AgNO₃ 作固定相，以乙腈-正己烷（1∶99）作淋洗液進(jìn)行分離。其分離機(jī)制可能是銀離子與雜環(huán)烴中的氮原子形成絡(luò)合物。也可用 Corasil 涂漬0.3%BOP 作固定相，二異丙醚作淋洗液進(jìn)行分離。

      002年4月，瑞典斯德哥爾摩大學(xué) Margareta Tornqvist 教授在油炸及焙烤的馬鈴薯和谷物類食品中發(fā)現(xiàn)了具有神經(jīng)毒性的潛在致癌物——丙烯酰胺（acrylamide），該毒物很容易經(jīng)消化道、皮膚、肌肉或其他途徑吸收，并能通過胎盤屏障，是一種*的神經(jīng)毒素和準(zhǔn)致癌物，已被 WHO 癌癥研究中心（IRAC）列為可能致癌物質(zhì)（ⅡA類）。

      2005年4月13日，我國衛(wèi)生部發(fā)布了“建議全國消費者避免食用油炸薯片和油炸薯條”的公告，呼吁采取措施減少食品中丙烯酰胺可能導(dǎo)致的對健康的危害。柳其芳等研究了檢測食品中致癌物丙烯酰胺的固相萃取-二極管陣列檢測-反相液相色譜測定方法，用水提取食品中的丙烯酰胺，采用C₁₈固相萃取小柱對樣品液進(jìn)行純化，流動相為甲醇-水（5∶95），DAD 掃描波長范圍190～370nm，檢測波長 210nm。結(jié)果表明，丙烯酰胺在0.1～10mg/L 濃度范圍內(nèi)線性良好，方法檢出限為10ng/g。用建立的方法分析了59份面包、谷類、豆類、堅果類和土豆類食品，結(jié)果顯示，食品炸焦的程度越深，則丙烯酰胺的含量越高。

5、HPLC 在其他食品分析檢測中的應(yīng)用

       HPLC 可用于食用藥材指紋圖譜的檢測。劉洪宇等建立了不同加工方法制成的玄參飲片的 HPLC 指紋圖譜測定方法，研究不同種類玄參飲片對指紋圖譜的影響。郜玉鋼等采用反相液相色譜對農(nóng)田人參與伐林人參中9種人參皂苷單體的含量進(jìn)行比較分析，從而建立了同時測定農(nóng)田人參中9種人參皂苷單體含量的方法。HPLC 還可用于食品中其他營養(yǎng)成分的分析檢測。何康昊等建立了蛋黃中角黃素及蝦青素的反相液相色譜-二極管陣列檢測法（RHPLC-DAD）。李艷等采用液相色譜法測定了豆類及豆制品中大豆異黃酮的含量。

文章來源：EWG1990儀器學(xué)習(xí)網(wǎng)